Rezumat: Compoziția proteică de suprafață a veziculelor extracelulare (EV) este legată de celula originară și poate juca un rol în funcția veziculelor. Cunoașterea conținutului proteic ​​ale EV-urilor individuale este încă limitată din cauza provocărilor tehnice de a analiza a veziculelor mici. Aici, introducem o nouă platformă multiplex bazată pe particule magnetice pentru a investiga până la 39 de markeri de suprafață diferiți într-un eșantion. Combinația de particule de captură anticorp cu anticorpi de detectie marcați fluorescent permite analiza EV-urilor care poartă markeri de suprafață recunoscuți de ambii anticorpi. Această nouă metodă permite un screening ușor al markerilor de suprafață pe populațiile de EV. Prin combinarea diferiților anticorpi de captare și detectie, se obțin informații suplimentare despre nivelurile relative de expresie și subpopulațiile de vezicule potențiale. De asemenea, am stabilit un protocol pentru vizualizarea EV-urilor individuale prin STED. Astfel, markerii pe EV-uri individuale pot fi detectați de anticorpi conjugați cu fluorocromi. Am folosit platforma multiplex și microscopia STED pentru a arăta pentru prima dată că EV-urile derivate din celule NK și EV-urile derivate din trombocite sunt lipsite de CD9 sau respectiv CD81 și că EV-urile izolate din celulele B activate cuprind subpopulații EV diferite. Speculăm că, conform datelor noastre STED, tetraspaninele ar putea să nu fie distribuite în mod omogen, dar pot apărea mai ales ca grupuri pe subpopulațiile EV. În cele din urmă, demonstrăm că amestecurile EV pot fi separate cu ajutorul particulelor magnetice și analizate ulterior cu platforma multiplex. Atât platforma multiplexă bazată pe particule, cât și microscopia STED au dezvăluit subpopulații de EV care nu au putut fi distinse de majoritatea instrumentelor de analiză utilizate până acum. Ne așteptăm ca o viziune aprofundată asupra eterogenității EV va contribui la înțelegerea diferitelor EV și funcțiilor acestora.

Citeste articolul